خلاصه
دراين مطالعه اثرات سودمندي احتمالي اضافه کردن ژلاتين به رقيق کننده پايه شير ، براي ذخيرة جامد مني گوسفند در ?c15 مورد ارزيابي قرار گرفت. آزمايش اول اثرات ذخيرة جامد روي تحرک و سلامت غشا در طي دورة دو روزه و آزمايش دوم ظرفيت نفوذ پذيري اسپرم بعد از 24 ساعت ذخيره در شرايط آزمايشگاهي را مورد بررسي قرار داد. در هر دوي آزمايشات از رقيق کننده شير (به عنوان شاهد) وژل(5/1 گرم ژلاتين در 100 ميلي ليتر رقيق کننده) استفاده شد و غلظت نهايي اسپرم 106×400 بدست آورده شد. در آزمايش اول بعد از ذخيرة مني در ?c 15 ، تغييرات کيفي اسپرم بعد از 24،2 و 48 ساعت مورد آناليز قرار گرفت.تحرک و زنده ماني در روش ذخيرة مايع در مقايسه با رقيق کننده ژلي به طور معني داري در همة دوره هاي زماني، به استثناي دو ساعت بعد از ذخيره شدن کاهش يافت. طي دو ساعت انکوباسيون در ?c 37 ، درصد سلول هاي متحرک واسپرم هاي با غشاهاي سالم در گروه شاهد نسبت به گروه ژل در همة دوره هاي زماني به طور معني داري پائين بود. اووسيت ها بطور تصادفي در سه گروه قرار گرفته و بوسيلة مني رقيق شده با شير و مني رقيق شده با ژل بارور شده و به ترتيب براي 2 يا 24 ساعت (در مورد رقيق کننده اول) و 24 ساعت (در مورد رقيق کننده دوم) ذخيره گرديدند. بعد از انکوباسيون، اووسيت ها جهت اثرات نفوذپذيري مورد ارزيابي قرار گرفتند.ذخيرة مني در رقيق کننده ژل (24 ساعت) نسبت به رقيق کننده گروه شاهد، باعث افزايش نرخ باروري در شرايط آزمايشگاهي مي شود. اين مطالعه همچنين نشان داد که ذخيرة جامد اسپرم قوچ در ?c 15 با اضافه کردن ژلاتين به رقيق کننده نسبت به رقيق کننده هاي مايع معمولي باعث افزايش قدرت زنده ماني و توانايي نفوذپذيري در شرايط آزمايشگاهي مي شود. بنابراين ذخيرة جامد اسپرم يک روش مناسب و مفيد براي حفاظت مني تازة گوسفند در طي يک دورة زماني مي باشد.
مقدمه:
اخيرا تلقيح مصنوعي در گوسفند بدليل کاهش باروري بعد از تلقيح گردن رحمي با مني منجمد شده ، کمتر مورد توجه قرار مي گيرد. تلقيح درون رحمي (لاپاراسکوپي)،باعث افزايش نرخ باروري مي شود ولي بدليل هزينة بالا و زمان بر بودن و نياز به وسايل و لوازم خاص، چندان مورد استفاده قرار نمي گيرد. استفاده از مني سرد شده ، عملي، ارزان، آسان و از لحاظ اقتصادي باصرفه تر مي باشد. عليرغم مطالعات متعدد بر روي ارزيابي رقيق کننده هاي مايع، اما هنوز موانع زيادي در استفاده از مني سرد شده در برنامه هاي تلقيح مصنوعي وجود دارد. در کشورهاي مديترانه اي براي حفاظت مني گوسفند در ?c 15جهت تلقيح مصنوعي، از شير بعنوان رقيق کنندة اصلي استفاده مي شود. از رقيق کننده ها جهت حفظ توانايي باروري اسپرم بعد از 10-8 ساعت استفاده مي کنند. با افزايش ويسکوزيتة محيط و در نتيجه کاهش تحرک اسپرم، استفاده از مکمل هايي مثل ژلاتين در رقيق کننده ها را ضروري مي کند که اين کار براي اولين بار در گوسفند مورد ارزيابي قرار گرفت. در اکثر مطالعات صورت گرفته بيشتر از خرگوش استفاده شده است. اضافه نمودن ژلاتين (1گرم در 100 ميلي ليتر رقيق کننده روي زنده ماني و سلامت آکروزوم اسپرم هايي که براي 72 ساعت ذخيره شدند اثر مثبتي دارد. در گزارشات قبلي نيز به ذخيرة جامد اسپرم خرگوش در رقيق کننده با مکمل ژلاتين و توانايي باروري تا 72 ساعت بعد از ذخيره شدن اشاره شده است. هدف از اين آزمايشات ارزيابي اثرات سودمندي احتمالي ذخيرة جامد(بوسيلة اضافه کردن ژلاتين به رقيق کننده) مني قوچ در ?c 15 روي تحرک و سلامت غشا اسپرم در يک دورة زماني 48 ساعته وميزان نفوذپذيري در شرايط آزمايشگاهي بعد از 24 ساعت ذخيره مي باشد.
مواد و روش ها
رقيق کننده مايع استاندارد(شاهد) با شير حرارت ديدة داراي 7. 0 چربي و آنتي بيوتيک (پني سيلين 2000 واحد بين المللي در ميلي ليتر و استرپتومايسين4/0ميلي گرم در ميلي ليتر) رقيق شد. رقيق کننده ژل با اضافه کردن 5/1 ژلاتين نوع A و ژل قوي بلوم?C240 در رقيق کننده شير مايع استاندارد بدست آمد.
جمع آوري و آماده سازي
در تمامي آزمايشات مني از چهار قوچ بالغي<
